在miRNA研究中，验证miRNA与靶基因之间的关系是一个重要环节。miRNA通过其种子序列（5’端第2-8个碱基）与mRNA的3’UTR区域结合，从而诱导细胞内沉默复合体介导的mRNA降解或抑制mRNA的翻译。基于这一机制，我们通常将目标基因的3'UTR区（或结合位点下游500bp）插入荧光素酶报告基因载体luciferase的下游，并与miRNA mimics共同转染目标细胞，随后加入底物以检测荧光素酶活性的变化。如果荧光素酶活性下调，则说明该miRNA与靶基因的3'UTR区域存在相互作用。

常用的载体为PGL3-CMV-LUC-MCS。双荧光素酶报告基因检测的工作原理主要包含以下步骤：首先利用生物信息学分析软件（如TargetScan、StarBase和miRanda等）预测特定靶基因的3'-UTR区序列是否存在miRNA结合位点。接着将能够与miRNA结合的靶基因3'-UTR序列插入荧光素酶的3'-UTR区域。当miRNA绑定到质粒中的插入序列后，便会抑制萤火虫荧光素酶的翻译，最终导致荧光值降低。这一方法可以有效验证miRNA与靶基因3'UTR之间的相互作用，从而为miRNA功能研究及调控网络提供有力的工具。

在进行双荧光素酶报告基因检测服务时，我们会遵循详细的操作步骤进行材料与细胞准备。以HEK293细胞或指定细胞为例，首先确认质粒的转染效率。根据转染试剂的说明书，选择合适的转染体系，确保质粒瞬转效率达到40%以上。

实验步骤如下：首先用0.25%胰酶消化处于对数生长期的细胞，并用完全培养基悬浮成单细胞悬液，接种于24孔培养板中。培养过夜后，当细胞覆盖率达到约70%时进行转染。转染前换成新鲜培养基，并按说明书进行转染。在转染48小时后收集细胞样品。细胞样品的收集包括用PBS洗涤细胞、加入裂解缓冲液并进行裂解，最终将样品存储于-80度冰箱。

报告基因检测试剂盒的使用也非常关键，实验过程中需要进行全面的样品处理和荧光素酶活性的测定。通过严格遵循实验步骤，最终可以获得关于miRNA与靶基因之间相互作用的可靠数据。

我们提供双荧光素酶报告基因检测服务，旨在加速基础研究及药物筛选的进程。在此过程中，您将得到专业的技术支持和指导，以确保实验顺利进行。选择人生就是博，让您的研究更高效、更精准。

相关产品清单包括：双荧光素酶报告基因检测试剂盒、转染试剂等，详细产品信息请访问我们的网站。