人生就是博的SV40转染人成骨细胞HFOB119培养指南为您的细胞培养提供了详尽的步骤和注意事项，以确保最佳实验效果。

一、细胞培养条件

细胞名称：SV40转染人成骨细胞HFOB119

生长特性：贴壁生长

冻存条件：选择无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：DMEM/F12 + 0.3 mg/ml G418 + 10% FBS

传代方法：首次建议1:2传代。若传代后2天未更换培养基，请及时更换。

备注：使用无菌离心管收集培养基进行对比实验，如效果不理想，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞处理与维持

细胞收到后，应在良好状态条件下灌满完全培养液并封闭瓶口。运输细胞时建议用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，随后在超净工作台内进行严格的无菌操作，将其置于35℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态。通过显微镜观察细胞生长情况，并拍照保存（建议不同倍数各一张），前三天的照片为重要售后依据，未提供照片将默认收到的细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

1. 细胞传代：

若细胞汇合度未超过80%，请收集培养液至离心管中，剩余5ml完全培养基置于35℃、5% CO2孵箱中培养。若细胞密度超过80%，可继续以下步骤：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于35℃培养箱消化1-2分钟，观察细胞状况，如细胞大部分变圆并脱落，请立即停用消化液，并添加超过5ml完全培养基。
3. 轻轻吹打细胞以使其完全脱落，吸出悬液并转移至15ml离心管中，在1000 RPM下离心5分钟，弃去上清液，用1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充5-8ml新完全培养基，最后放入35℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

2. 细胞冻存：

1. 细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，用PBS清洗。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞回缩后加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打然后转移至离心管，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 冻结细胞可直接存放于-80℃冰箱中，需转移至液氮罐则需在-80℃存放24小时后进行。

3. 细胞复苏：

1. 从液氮中取出冻存管（注意防护），迅速置于35℃水浴中解冻，确保无结晶后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清后，用5ml完全培养基重悬细胞并接种至T25培养瓶，放于35℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天更换新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

贴壁性不强的细胞在运输中可能出现脱落现象，此为正常。如脱离较多，请将所有培养液收集于离心管中，进行1000 RPM离心5分钟，并收集上清作对比培养。之后添加胰酶1-2ml，轻轻吹打使细胞脱落，消化1-2分钟，再添加5ml完全培养基终止反应。随后再次离心并重悬后按1:2比例分瓶传代，补充新完全培养基，放入培养箱中。

五、售后条款

若细胞出现问题，可重发的情况包括运输过程中的损失、细胞污染等，并需在规定时间内提供真实实验数据及照片。若客户造成污染或不正确操作，则不予重发。请注意，所有操作需严格按照本指南执行，以确保细胞状态良好。

总之，使用人生就是博品牌的SV40转染人成骨细胞HFOB119时，遵循上述培养指南与售后条款，将有效提升您实验的成功率。